Screening of RET gene mutations in multiple endocrine neoplasia type-2 using Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE)

Multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN2) is an autosomal dominant inherited tumor syndrome caused by RET proto-oncogene germline mutations (RET). Here we tested the Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) as a screening method for RET hot-spot mutations. Seven MEN2 families were studied by direct sequencing analysis, CSGE and Single Strand Conformational Polymorphism (SSCP). Using CSGE/SSCP, we were able to detect four out of five types of RET mutations verified by sequencing analysis: Cys620Arg, Cys634Arg, Cys634Tyr, and Met918Thr, furthermore a missense substitution at codon 648 (Val648Ile). RET polymorphisms 691 and 769 were also verified. Data obtained using CSGE/SSCP were fully concordant. We conclude that CSGE showed to be a sensitive, fast, low-cost, and simple procedure to detect RET mutations in codons which are reported as the most prevalent RET variants (~ 95 percent) in large MEN2 series. As to the Val804Met mutation, this method still needs to be optimized.

A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM2) é uma síndrome tumoral herdada por mutações germinativas no proto-oncogene RET (RET). Analisamos a aplicação do método Eletroforese em Gel Sensível à Conformação (CSGE) no rastreamento de mutações hot spots do RET. Sete famílias com NEM2 foram rastreadas pelo seqüenciamento gênico, CSGE e análise do Polimorfismo Conformacional de Cadeia Simples (SSCP). Usando ambas as metodologias de rastreamento, identificamos quatro dos cinco tipos de mutações verificadas pelo seqüenciamento: Cys620Arg, Cys634Arg, Cys634Tyr e Met918Thr, além da variação gênica Val648Ile. Das análises englobando mutações hot spots do RET, 90,6 por cento concordaram com o seqüenciamento genético (incluindo a variação gênica Val648Ile). Polimorfismos nos códons 691 e 769 foram documentados. Os dados obtidos por CSGE/SSCP foram totalmente concordantes. Concluímos que o CSGE revelou ser metodologia sensível, rápida, de fácil execução e baixo custo no rastreamento de mutações nos códons associados à grande maioria (~ 95 por cento) dos pacientes com NEM2.

Síndrome poliglandular autoimune do tipo I com hipoparatireoidismo, candidíase mucocutânea crônica e malabsorçäo intestinal / Polyglandular autoimmune syndrome type I with hypoparathyroidism chronic mucocutaneous candidiasis and intestinal malabsorption

A ocorrência de candidíase mucocutânea crónica e hipoparatireoidismo (síndrome poliglandular auto-imune do tipo I) é descrita em uma paciente de 13 anos. Além de candidíase desde os 3 anos, apresentava convulsöes desde os 6 anos, cataraata aos 9 anos, alteraçöes dentárias e calcificaçöes dos gánglios da base. Os exame laboratoriais confirmaram o diagnóstico de hipoparatireoidismo. Este quadro era acompanhado por uma malabsorçäo intestinal, levando a paciente a um estado de desnutriçäo progressiva, com hipoalbuminemia importante e anemia. Embora a fisiopatologia da malabsorçäo, nesses casos, ainda näo esteja esclarecida, a resposta terapêutica à pancreatina, na presente observaçäo, foi sugestiva de haver insuficiência pancreática, mesmo porque a provada d-xilose foi normal e a biopsia do delgado inespressiva